医学实验室生物安全防护详细

动物约有动物约有200200种传染病、种传染病、8080种寄生虫病，种寄生虫病，其中半数可以感染给人其中半数可以感染给人 动物感染实验，有病原体随尿粪、唾液动物感染实验，有病原体随尿粪、唾液排出，有感染性气溶胶扩散的危险排出，有感染性气溶胶扩散的危险 剖检动物时，有接触病原体的危险，还剖检动物时，有接触病原体的危险，还可能被动物咬伤或注射器、手术刀的创可能被动物咬伤或注射器、手术刀的创伤等伤等 肿瘤病毒引起的潜在致癌性等生物危害肿瘤病毒引起的潜在致癌性等生物危害 国内外曾多次发生因饲养野鼠或大白鼠而国内外曾多次发生因饲养野鼠或大白鼠而发生肾综合征出血热流行发生肾综合征出血热流行 19991999年广州中医药大学博士后张某从事年广州中医药大学博士后张某从事“九五九五”国家攻关课题国家攻关课题“补肾法治疗老年补肾法治疗老年性痴呆性痴呆”的实验时接触大鼠，的实验时接触大鼠，3 3个月后感染个月后感染流行性出血热，流行性出血热，20032003年被诊断为肾功能衰年被诊断为肾功能衰竭，竭，20062006年进行肾移植手术年进行肾移植手术 20022002年年, ,湖北省药检学校的一名毕业生在某湖北省药检学校的一名毕业生在某药厂从事动物实验工作，由于接触了带出药厂从事动物实验工作，由于接触了带出血热病毒的实验动物而感染流行性出血热血热病毒的实验动物而感染流行性出血热不治死亡不治死亡 20012001年年6 6月，北京发生了因使用质量不合格实验月，北京发生了因使用质量不合格实验动物和动物实验不规范致使鼠源性人兽共患病动物和动物实验不规范致使鼠源性人兽共患病流行性出血热感染：一名院士死亡和流行性出血热感染：一名院士死亡和700700多师生多师生紧急预防接种紧急预防接种 20062006年，东北三省由于个体户养殖、贩运不合年，东北三省由于个体户养殖、贩运不合格实验动物，导致几十名教学科研人员感染流格实验动物，导致几十名教学科研人员感染流行性出血热行性出血热 广东省，广东省，19901990年和年和19971997年分别出现因使用不合年分别出现因使用不合格实验动物而感染人畜共患病的严重生物安全格实验动物而感染人畜共患病的严重生物安全事故事故 实验室生物安全防护的内容包括实验室生物安全防护的内容包括安全设备安全设备、个体防护个体防护装装置和措施（置和措施（）；）；实验室的特殊设计和建设实验室的特殊设计和建设（分（分区、单向气流）区、单向气流）要求（要求（）；严格的管理制度和）；严格的管理制度和标准化的操作程序及规程（标准化的操作程序及规程（） 应将每一特定实验室从立项、建设到使用维护的全过程应将每一特定实验室从立项、建设到使用维护的全过程中有关生物安全防护综合措施的内容编入各实验室的生中有关生物安全防护综合措施的内容编入各实验室的生物安全手册中。必须设有专职的生物安全负责人物安全手册中。必须设有专职的生物安全负责人根据不同的微生物和防护要求分为根据不同的微生物和防护要求分为个生物安全防护级别个生物安全防护级别 实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训上岗培训，达到合格标准，方可开始工作，达到合格标准，方可开始工作 实验室的工作人员必须被告知实验室工作的实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危潜在危险险并接受实验室安全教育，并接受实验室安全教育，自愿自愿从事实验室工作从事实验室工作 实验室的工作人员必须实验室的工作人员必须实验室的所有实验室的所有制度制度、规、规定和定和操作规程操作规程（）（biosafety cabinet）是处是处理危险性微生物时所用的箱型空气净理危险性微生物时所用的箱型空气净化安全装置化安全装置 I级生物安全柜级生物安全柜（class I biosafety cabinet） 至少装置一个高效空气过滤器对排气进至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，外部空气由操作窗行净化，外部空气由操作窗吸进吸进，而不，而不可能由操作窗口可能由操作窗口逸出；逸出；100%由密接排气由密接排气导管排到室外导管排到室外 （类似于通风厨类似于通风厨） 工作状态时保证工作状态时保证工作人员工作人员不受侵害，但不受侵害，但不保证不保证实验对象实验对象不受污染不受污染。 现已很少使用现已很少使用 至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出吸进，而不可能由操作窗口逸出 工作状态下遵守操作规程时既保证工作状态下遵守操作规程时既保证不受不受侵害，又保证侵害，又保证及及不受污染不受污染级生物安全柜级生物安全柜（class biosafety cabinet） 级生物安全柜级生物安全柜（class biosafety cabinet） 全封闭的、气密结构的通风柜全封闭的、气密结构的通风柜 通过与柜体联结的通过与柜体联结的橡胶手套橡胶手套进行操作；进行操作； 柜内保持至少柜内保持至少的负压的负压(0.50wg)(0.50wg)； 供气通过供气通过HEPAHEPA抽入内；抽入内； 外排的气流经过外排的气流经过双层双层HEPAHEPA过滤或经过滤或经HEPAHEPA后再经燃烧处理。后再经燃烧处理。隔离器隔离器IIIIIII级级有有是是否否否否否否II级级有有是是是是是是否否III级级有有是是是是是是是是 实验室防护服实验室防护服 面部防护面部防护 手套手套 呼吸防护呼吸防护 生物安全实验室不同于其它普通实验室，生物安全实验室不同于其它普通实验室，是从事对人可能产生危害的生物实验场所是从事对人可能产生危害的生物实验场所 尤其是三级和四级生物安全实验室主要用尤其是三级和四级生物安全实验室主要用于对人、畜有高度传染性的烈性传染病的于对人、畜有高度传染性的烈性传染病的研究（如反恐）和检测（如研究（如反恐）和检测（如）的工）的工作作生物安全实验室的分类分级生物安全实验室的分类分级 实验室分类实验室分类 一般生物安全防护实验室一般生物安全防护实验室(不使用实验脊椎动物和昆虫不使用实验脊椎动物和昆虫) 实验脊椎动物生物安全防护实验室实验脊椎动物生物安全防护实验室 （A A） 实验室生物安全防护分级实验室生物安全防护分级 一级最低，四级最高一级最低，四级最高大肠杆菌大肠杆菌 格鲁伯耐格里原虫格鲁伯耐格里原虫 感染性犬肝炎病毒感染性犬肝炎病毒 枯草杆菌枯草杆菌 实验室应设洗手池（靠近出口处）实验室应设洗手池（靠近出口处） 实验室围护结构内表面应易于清洁。地面应防实验室围护结构内表面应易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯滑、无缝隙，不得铺设地毯 实验室中的家具应牢固。应有专门放置生物废实验室中的家具应牢固。应有专门放置生物废弃物容器的台（架）弃物容器的台（架） 实验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热实验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热 实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗 工作过程中禁止非工作人员进入实验室。工作过程中禁止非工作人员进入实验室。 接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手套后和离开实验室前要洗手 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及存储食物化妆及存储食物标准微生物操作规程标准微生物操作规程 安全设施和个体防护安全设施和个体防护n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于 麻疹病毒麻疹病毒 沙门氏菌沙门氏菌 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 HIV 血清学检测血清学检测 衣原体衣原体 志贺氏菌志贺氏菌二级生物安全防护实验室二级生物安全防护实验室 消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等）消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等） 洗眼装置洗眼装置 可自动关闭的门锁可自动关闭的门锁 门口有发光指示装置门口有发光指示装置 换气装置（换气装置（3-4次次/小时）小时）满足一级实验室满足一级实验室 ( (标准微生物操作规程标准微生物操作规程) ) 各各款要求，在此基础上特别注意：款要求，在此基础上特别注意： 制定出入制度制定出入制度 实验室人口贴上实验室人口贴上生物危险标志生物危险标志 制定实验室特定的生物安全操作规则制定实验室特定的生物安全操作规则 每年一次最新培训制度每年一次最新培训制度 工作人员应接受必要的工作人员应接受必要的和检测和检测 (如如乙型乙型肝炎疫苗肝炎疫苗，卡介苗卡介苗等等) 必要时收集从事危险性工作人员的必要时收集从事危险性工作人员的本底血清本底血清 严格执行实验室工作人员年度采血检测严格执行实验室工作人员年度采血检测 HIV 抗抗体和备案制度。每半年进行一次体和备案制度。每半年进行一次 HIV 抗体检测，抗体检测，并保留样品并保留样品 对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外事故造成事故造成HIV 职业暴露者，所在单位应负责解决职业暴露者，所在单位应负责解决抗病毒及其它相应治疗的医疗费用抗病毒及其它相应治疗的医疗费用 实验设备在运出修理或维护前必须进行实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒消毒 人员暴露于感染性物质时，及时向实验人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案方案 禁止将无关动物带入实验室禁止将无关动物带入实验室处理以下致病微生物时应在生物安全柜处理以下致病微生物时应在生物安全柜 (级级) 中进行中进行 ，包括包括: 高浓度高浓度 大容量大容量 有喷溅可能性有喷溅可能性上述材料的离心操作如使用密封的离心机转子或安全离上述材料的离心操作如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行 级生物安全柜必须每年进行一次年度现场检测级生物安全柜必须每年进行一次年度现场检测安全设施和个体防护安全设施和个体防护 当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用用面部保护装置面部保护装置 应有相应的应有相应的SOP 在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃洗涤或丢弃 当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。下列操作必须在下列操作必须在P2P2实验室或全排式实验室或全排式生物安全柜中进行生物安全柜中进行l l、含漱液、血清和血液等样品的诊断检测、含漱液、血清和血液等样品的诊断检测2 2、溶解、固定或用其他方法处理灭活的病毒和、溶解、固定或用其他方法处理灭活的病毒和( (或或) )无传染性无传染性 的病毒基因片段的病毒基因片段 3 3、常规的细菌和毒素检查、常规的细菌和毒素检查4 4、可能产生气溶胶的样品处理、可能产生气溶胶的样品处理5 5、临床样品的包装、分装、临床样品的包装、分装6 6、离心管和离心机转头的封闭和开启、离心管和离心机转头的封闭和开启n包含微生物举例包含微生物举例 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 牛分枝杆菌牛分枝杆菌 鼠疫杆菌鼠疫杆菌 炭疽杆菌炭疽杆菌 Q Q热病原体热病原体 HIV (HIV (血清学检测除外血清学检测除外) ) 澳大利亚立克次氏体澳大利亚立克次氏体 加拿大立克次氏体加拿大立克次氏体 下列操作必须在下列操作必须在P3P3实验室中进行实验室中进行l l、 用细胞培养的方法分离病毒用细胞培养的方法分离病毒2 2、收集或浓缩病毒或其培养产物、收集或浓缩病毒或其培养产物 3 3、用活病毒或病毒的全基因接种动物、用活病毒或病毒的全基因接种动物4 4、咽拭子样品的诊断检测、咽拭子样品的诊断检测P3实验室示意图n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有对人体具有，通过气溶胶途径传播或传，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素微生物及其毒素n与上述情况类似的与上述情况类似的，也必须在，也必须在生物安生物安全防护实验室中进行，带有充分数据后再决定此种微全防护实验室中进行，带有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级别的实验室中处理生物或毒素应在四级还是在较低级别的实验室中处理 黄病毒黄病毒 埃博拉病毒埃博拉病毒 中欧蜱传脑炎病毒中欧蜱传脑炎病毒 美国国立卫生研美国国立卫生研究所究所美国疾病控制美国疾病控制中心中心病病 源源操操 作作一级屏障一级屏障二级屏障二级屏障P1P1BSL1不会经常引发健康成人疾病标准的微生物操作不要求开放实验台、洗手池P2P2BSL2人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生危险BSL1操作外加：1、限制进入2、有生物危险警告标志3、“锐器”安全措施4、生物安全手册，其中规定废物消毒和医疗观察1级、2级生物安全柜实验服、手套、若需要则采取面部保护措施 BSL-1外加：高压灭菌锅P3P3BSL3内源性和外源性病源，可通过气溶胶传播，能导致严重后果或生命危险 BSL-3 BSL-2操作外加：1、控制进入2、所有废物消毒3、洗涤前，实验服消毒4、有基础血清1级、2级生物安全柜保护性实验服、手套、若需要则采取呼吸保护措施BSL-2外加：1、和进入走廊隔开2、双门进入，门自动关闭3、排出的空气不循环4、实验室内负压P4P4BSL4对生命有高度危险的危险性病源或外源性病源：致命、通过气溶胶而致实验室感染：或未知传播风险的有关病源BSL3操作外加：1、进入前换衣服2、出实验室前淋浴3、带出设施的所有材料消毒3级生物安全柜或1级、2级生物安全柜加全身的、供应空气的正压防护服BSL3外加：1、单独建筑或隔离区域2、有供气系统、排气系统、真空系统、消毒系统3、其他有关要 样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般不能用全血除特殊需要外，一般不能用全血且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记。清楚地标记为的标记。清楚地标记为感染性材料感染性材料感染性材料必须放在感染性材料必须放在密闭的管子密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料中，再放入含有足够吸水材料的生物危险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，的生物危险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软容器的材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外表有性物质，以免破碎，容器外表有HIVHIV检测专用字样。如果路程较检测专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容器应至于远或者气候炎热时，盛有样本的容器应至于44以下转运以下转运生物危险生物危险级级实验室的生物安全防护实验室的生物安全防护 职业暴露职业暴露是指实验室、医护、预防保健人员以及有关是指实验室、医护、预防保健人员以及有关的监管工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作的监管工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作的过程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、的过程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、体液污染了破损的皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有艾体液污染了破损的皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其它锐器刺破滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其它锐器刺破皮肤，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情况皮肤，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情况影响针头刺伤后的危影响针头刺伤后的危险性因素包括险性因素包括 伤口的深度伤口的深度有可见的血液从伤口溢出有可见的血液从伤口溢出针头刺破了静脉或动脉针头刺破了静脉或动脉污染源来自于晚期艾滋病病毒感染者污染源来自于晚期艾滋病病毒感染者( (病病毒载量高毒载量高) )皮肤针刺伤或切割伤皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤出的血液，用水冲洗，尽可能挤出损伤出的血液，用70%70%乙乙醇或其它消毒剂消毒伤口醇或其它消毒剂消毒伤口皮肤污染：皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如适当的消毒剂浸泡，如70%70%乙醇或其它皮肤消乙醇或其它皮肤消毒剂毒剂粘膜污染粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位污染部位衣物污染衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理处理污染物泼溅污染物泼溅： 发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理；消毒处理； 发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序查清情况，确定消毒的程序HIVHIV职业暴露后的预防职业暴露后的预防对感染可能性很大的医护、检验人员可使用对感染可能性很大的医护、检验人员可使用预防性治疗药物，治疗方案须根据暴露情况预防性治疗药物，治疗方案须根据暴露情况由专家决定。对于感染危险性很小的，建议由专家决定。对于感染危险性很小的，建议不使用药物预防不使用药物预防对可能有危险的人，是否用药治疗，应权衡对可能有危险的人，是否用药治疗，应权衡较低的感染危险性与使用药物的效力和药物较低的感染危险性与使用药物的效力和药物毒、副反应以及坚持用药的依从性等利弊毒、副反应以及坚持用药的依从性等利弊基本用药程序基本用药程序：两种逆转录酶抑制剂，使用常：两种逆转录酶抑制剂，使用常规治疗剂量，连续服用规治疗剂量，连续服用2828天。如双汰芝（天。如双汰芝（AZTAZT与与3TC3TC联合制剂）联合制剂） 300 mg/300 mg/次，每日次，每日2 2次，用药时次，用药时间为连续服用间为连续服用2828天。或参考抗病毒治疗指导方天。或参考抗病毒治疗指导方案。本程序适用于案。本程序适用于轻度低危暴露轻度低危暴露强化用药程序强化用药程序：基本用药程序加一种蛋白酶抑：基本用药程序加一种蛋白酶抑制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗剂量，连续服用剂量，连续服用2828天。本程序适用于天。本程序适用于严重暴露严重暴露 职业暴露后，存在感染艾滋病毒的危险性，职业暴露后，存在感染艾滋病毒的危险性，但实际感染艾滋病毒的但实际感染艾滋病毒的是是的。的。 研究资料表明，医务工作者被艾滋病病毒污研究资料表明，医务工作者被艾滋病病毒污染的染的后，发生艾滋病病毒感染的机后，发生艾滋病病毒感染的机率为率为 （20/613520/6135），），的感染的感染艾滋病病毒的机率为艾滋病病毒的机率为 （1/11431/1143） 最主要的职业是最主要的职业是和和除三名实验室人员是暴露于艾滋病病毒培养除三名实验室人员是暴露于艾滋病病毒培养以外，其余全部是由于污染血液或体液以外，其余全部是由于污染血液或体液到到19971997年为止，外科医生和被缝合针刺伤的年为止，外科医生和被缝合针刺伤的暴露者中没有发生肯定的艾滋病病毒感染暴露者中没有发生肯定的艾滋病病毒感染分析美国发生的分析美国发生的5252名职业暴露后艾滋病病毒名职业暴露后艾滋病病毒感染者，发现：感染者，发现：