细胞培养基本知识基本技术学习教案

会计学1第一页，共67页。第1页/共67页第二页，共67页。特性。第2页/共67页第三页，共67页。第3页/共67页第四页，共67页。第4页/共67页第五页，共67页。第5页/共67页第六页，共67页。第6页/共67页第七页，共67页。第7页/共67页第八页，共67页。第8页/共67页第九页，共67页。20-28h第9页/共67页第十页，共67页。一群细胞(xbo)的增殖：细胞(xbo)生长曲线第10页/共67页第十一页，共67页。潜伏期/滞留期指数增长期平台期/停滞期退化(tuhu)或死亡第11页/共67页第十二页，共67页。第12页/共67页第十三页，共67页。并无限培养下去(xi q)。n大多数的二倍体细胞为有限细胞系。无限细胞系大多已发生变异。第13页/共67页第十四页，共67页。第14页/共67页第十五页，共67页。方法：方法： 将培养将培养(piyng)对象直接接种于培养对象直接接种于培养(piyng)瓶内，再放入培养瓶内，再放入培养(piyng)箱进箱进行培养行培养(piyng)。优点：优点：1、可以避免培养瓶表面粗糙等原因对培养物、可以避免培养瓶表面粗糙等原因对培养物的影响的影响(yngxing)。2、可以方便地进行显微镜观察、染色等操作，、可以方便地进行显微镜观察、染色等操作，以及永久保存。以及永久保存。3、增加了培养瓶的培养面积。、增加了培养瓶的培养面积。第15页/共67页第十六页，共67页。方法：将培养细胞方法：将培养细胞(xbo)接接种在培养板的孔内，然后在种在培养板的孔内，然后在CO2培养箱内培养。应培养培养箱内培养。应培养量较小也称为微量培养。量较小也称为微量培养。第16页/共67页第十七页，共67页。基本要点：将组织或器官植块接种在一张盖基本要点：将组织或器官植块接种在一张盖玻片上，滴上一滴玻片上，滴上一滴(y d)培养液，然后翻转培养液，然后翻转盖玻片使植块及营养液悬挂在盖玻片下，再盖玻片使植块及营养液悬挂在盖玻片下，再放置于一凹形载片之上，最后用溶蜡密封后放置于一凹形载片之上，最后用溶蜡密封后放入培养箱中培养。放入培养箱中培养。第17页/共67页第十八页，共67页。第18页/共67页第十九页，共67页。悬滴培养法基本(jbn)步骤1、在盖玻片上滴加胚胎提取液、血浆、在盖玻片上滴加胚胎提取液、血浆(xujing)和植块，混匀。培养基凝固后和植块，混匀。培养基凝固后将植块包埋。将植块包埋。2、在凹载片周围、在凹载片周围(zhuwi)涂凡士林。将涂凡士林。将凹载片向下压向盖玻片凹载片向下压向盖玻片3、将凹载片反转，盖玻片周围涂溶蜡。放、将凹载片反转，盖玻片周围涂溶蜡。放入培养箱培养入培养箱培养第19页/共67页第二十页，共67页。第20页/共67页第二十一页，共67页。(jidun)，广泛应用于生物学和，广泛应用于生物学和医学研究各个领域。医学研究各个领域。第21页/共67页第二十二页，共67页。无血清培养基无血清培养基:是不需要添加血清就可以是不需要添加血清就可以(ky)维维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。基但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。本成分为基础培养基及添加组分两大部分。观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。泌产物。往往针对性很强，价格偏高。往往针对性很强，价格偏高。第22页/共67页第二十三页，共67页。第23页/共67页第二十四页，共67页。第24页/共67页第二十五页，共67页。第25页/共67页第二十六页，共67页。优点：优点：1）研究的条件可以人为控制）研究的条件可以人为控制2）研究的样本均一）研究的样本均一3）研究内容方便）研究内容方便(fngbin)观察、检测、观察、检测、记录记录4）研究的费用相对于经济）研究的费用相对于经济缺点：体外培养的细胞不能完全等同于体缺点：体外培养的细胞不能完全等同于体内的细胞。内的细胞。第26页/共67页第二十七页，共67页。n细胞毒实验：药效测试n临床医学及生物技术：干细胞培养定向诱导分化后移植；组织(zzh)工程软骨损伤修复；试管婴儿第27页/共67页第二十八页，共67页。营养营养(yngyng)需要需要环 境 要 求无毒及无污染无毒及无污染第28页/共67页第二十九页，共67页。第29页/共67页第三十页，共67页。第30页/共67页第三十一页，共67页。用离心用离心3000rpm, 5 3000rpm, 5 分钟去除，也可分钟去除，也可不用处理不用处理n显微镜下显微镜下“小黑点小黑点”：经过热处理：经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点小黑点”，常误认为血清受污染。，常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的应立即停止使用，更换另一批号的血清血清第31页/共67页第三十二页，共67页。第32页/共67页第三十三页，共67页。第33页/共67页第三十四页，共67页。第34页/共67页第三十五页，共67页。第35页/共67页第三十六页，共67页。第36页/共67页第三十七页，共67页。第37页/共67页第三十八页，共67页。第38页/共67页第三十九页，共67页。第39页/共67页第四十页，共67页。第40页/共67页第四十一页，共67页。2、 环境(hunjng)要求第41页/共67页第四十二页，共67页。第42页/共67页第四十三页，共67页。酚红指示剂：黄酚红指示剂：黄 6.6 橙橙 8.0 红红第43页/共67页第四十四页，共67页。无无 毒：无毒是培养细胞的必需条件。毒：无毒是培养细胞的必需条件。凡与凡与 细胞直接或间接接触的东西细胞直接或间接接触的东西(dngx)都必须都必须 是无毒的。若具细胞毒性，是无毒的。若具细胞毒性，细胞容细胞容 易导致死亡。因此，选用器易导致死亡。因此，选用器皿和材皿和材 料时必须注意。料时必须注意。第44页/共67页第四十五页，共67页。无微生物的污染微生物的污染不同细胞类型的交叉污染不同细胞类型的交叉污染细菌细菌霉菌霉菌支原体支原体体外培养的细胞缺乏机体免疫系统，无防御能力，一旦发生体外培养的细胞缺乏机体免疫系统，无防御能力，一旦发生细菌细菌(xjn)等污染，细胞最终会死亡。等污染，细胞最终会死亡。交叉污染容易使细胞系失去原有特性。交叉污染容易使细胞系失去原有特性。第45页/共67页第四十六页，共67页。第46页/共67页第四十七页，共67页。开之容器正上方操作实验。容器开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约身，倾斜约4545角取用角取用n操作过程中注意操作过程中注意(zh y)(zh y)，有菌，有菌意识，无菌操作！意识，无菌操作！第47页/共67页第四十八页，共67页。第48页/共67页第四十九页，共67页。第49页/共67页第五十页，共67页。第50页/共67页第五十一页，共67页。第51页/共67页第五十二页，共67页。第52页/共67页第五十三页，共67页。n在电镜下观察，当细胞突起回在电镜下观察，当细胞突起回缩，细胞之间间隙增大，细胞缩，细胞之间间隙增大，细胞近乎缩成圆形即可。近乎缩成圆形即可。第53页/共67页第五十四页，共67页。n6. 用培养液重悬细胞，计用培养液重悬细胞，计数并调整细胞密度。数并调整细胞密度。第54页/共67页第五十五页，共67页。第55页/共67页第五十六页，共67页。第56页/共67页第五十七页，共67页。第57页/共67页第五十八页，共67页。第58页/共67页第五十九页，共67页。第59页/共67页第六十页，共67页。n复苏细胞应采用快速融化的方复苏细胞应采用快速融化的方法。法。n这样可以保证细胞外结晶在很这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免短的时间内即融化，避免(bmin)由于缓慢融化使水分由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。细胞造成损伤。第60页/共67页第六十一页，共67页。第61页/共67页第六十二页，共67页。第62页/共67页第六十三页，共67页。第63页/共67页第六十四页，共67页。理。也可放贴身口袋，一理。也可放贴身口袋，一般般4-5天都能存活，距离近天都能存活，距离近者还可倒掉培养液直接放者还可倒掉培养液直接放口袋运送。口袋运送。第64页/共67页第六十五页，共67页。 首要原则：所有感染性材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧。 用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有： 1、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？ 2、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他(qt)方面的危害？ 3.清除污染 高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法。需要清除污染并丢弃的物品应装在容器中。任何高压灭菌后重复使用的污染（有潜在感染性）材料不应事先清洗，任何必要的清洗、修复必须在高压灭菌或消毒后进行。 也可采用其他(qt)除去或杀灭微生物的替代方法 4.污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序 要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理，相关工作要遵守国家和国际规定。第65页/共67页第六十六页，共67页。第66页/共67页第六十七页，共67页。