维生素类药物的分析SYSH学习教案

会计学1第一页，共86页。第1页/共86页第二页，共86页。第2页/共86页第三页，共86页。脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸(y sun)、烟酸、烟酰胺VitMVitPP中国(zhn u)药典收载40多个品种第3页/共86页第四页，共86页。 公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来(huli)的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 维生素发展史第4页/共86页第五页，共86页。 1747年苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来(huli)的维C。 1831年胡萝卜素被发现。 1911年波兰化学家丰克为维生素命名。 维生素发展史第5页/共86页第六页，共86页。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国(yn u)医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。 维生素发展史第6页/共86页第七页，共86页。返 回第7页/共86页第八页，共86页。第一节 维生素A 维生素A包括(boku)有维生素A1（视黄醇）、去氢维生素A（维生素A2 ）和去水维生素A（维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，第8页/共86页第九页，共86页。-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸(c sun)酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :一、结构(jigu)和性质第9页/共86页第十页，共86页。环己烯共轭多烯侧链多异构体UV易被氧化(ynghu)结构(jigu)分析第10页/共86页第十一页，共86页。1、为一个(y )具有共轭多烯侧链的环己烯v （1）具有(jyu)UV吸收v （2）存在(cnzi)多种立体异构化合物v （3）易发生脱氢、脱水、聚合反应第11页/共86页第十二页，共86页。酸酸醛醛环氧化物环氧化物、氧化剂、氧化剂紫外线、紫外线、VitAVitAVitAOO2v 或有金属离子存在时更易(n y)氧化2、不稳定性第12页/共86页第十三页，共86页。3、与三氯化锑发生(fshng)呈色反应紫红紫红蓝色蓝色3SbClVitACHCl34、溶解性不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等第13页/共86页第十四页，共86页。1、三氯化锑反应(fnyng)紫红紫红蓝色蓝色3SbClVitACHCl3二、鉴别(jinbi)试验 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中呈现(chngxin)不稳定的蓝色，再变为紫红色。 第14页/共86页第十五页，共86页。反应条件(tiojin)： 要求无水，如存在水可能产生氯化氧锑（ SbOCl ）。 配制所用的氯仿不能含醇（应用无醇氯仿）和光气（COCl2）。 三氯化锑有腐蚀性。第15页/共86页第十六页，共86页。（BP（2010）VitAVitAHCl去水去水无水乙醇无水乙醇max为326nm一个(y )吸收峰UV法（二）max为350390nm348、367、389三个吸收(xshu)峰第16页/共86页第十七页，共86页。第17页/共86页第十八页，共86页。第18页/共86页第十九页，共86页。第19页/共86页第二十页，共86页。USP (29) 显色剂 磷钼酸 规定(gudng)斑点颜色和Rf值BP(2005) 杂质(zzh)对照品法 显色剂 三氯化锑TLC法（三）第20页/共86页第二十一页，共86页。三、含量(hnling)测定 1、紫外分光光度法 利用维生素A醇和其醋酸酯分子(fnz)中具多烯共轭体系结构，在325328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。第21页/共86页第二十二页，共86页。立体异构体氧化产物及光照(gungzho)产物合成中间体去氢维生素A（ VitA2）去水维生素A（ VitA3）均对测定有干扰，故采用(ciyng)三点校正法第22页/共86页第二十三页，共86页。 三点校正法（1）条件： 杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； 物质(wzh)对光的吸收具有加和性。第23页/共86页第二十四页，共86页。（2）波长的选择： 1 VitA的max（328nm） 2 3 分别在1的两侧(lin c)各选一点第24页/共86页第二十五页，共86页。测定(cdng)对象 VitA醋酸酯328340316328 第一(dy)法 等波长差法 3403163283282523AAA.A 校正校正第25页/共86页第二十六页，共86页。第26页/共86页第二十七页，共86页。第27页/共86页第二十八页，共86页。第二(d r)法 等吸收度法(皂化法)测定(cdng)对象 VitA醇32176 AAA 334310325325260455528156A.A.A.A 校正校正第28页/共86页第二十九页，共86页。第29页/共86页第三十页，共86页。第30页/共86页第三十一页，共86页。第31页/共86页第三十二页，共86页。第32页/共86页第三十三页，共86页。第33页/共86页第三十四页，共86页。 第一法 第二法测定对象 维生素A醋酸酯 维生素A醇方法 直接取样，测定 皂化提取，测定溶剂 环己烷 异丙醇max 328 nm 325 nm测定波长(bchng) 5个 4个换算因数 1900 1830第一法与第二(d r)法的区别第34页/共86页第三十五页，共86页。三氯化锑比色法蓝色3SbClVitA优点(yudin) 简便 快速max 618nm620nm标准(biozhn)曲线法 SbOClSbClOH32缺点呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性第35页/共86页第三十六页，共86页。第二节 维生素B1的分析(fnx)Vitamin B1治疗(zhlio)脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病 存在(cnzi)于米糠、麦麸和酵母中第36页/共86页第三十七页，共86页。UV氨基嘧啶环噻唑环氨基(nj)嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)第37页/共86页第三十八页，共86页。NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+ Cl HCl- 还原性碱性与酸成盐与生物碱非水碱(shujin)量法第38页/共86页第三十九页，共86页。NNH3CNH2CH2NSCH2CH2OHCH3ClHCl(1)(4)(3)(2)溶于水不溶于乙醚(y m) UV吸收(xshu)(mmax246nm)沉淀(chndin)反应碘化汞钾或硅钨酸等反应生成碱性中遇氧化剂(铁氰化钾)产生有荧光的硫色素 鉴别试验TLC 结构特点与鉴别硫色素反应 VB1特有(一 )(二 )(三 )硝酸铅反应氯化物反应(四)第39页/共86页第四十页，共86页。生成(shn chn)沉淀反应分子结构(fn z ji u)中含有杂环，易与生物碱沉淀剂 (碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸等作用形成组成恒定的沉淀 维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS 第40页/共86页第四十一页，共86页。荧光消失硫色素硫色素铁氰化钾铁氰化钾维生素维生素 OH1B正丁醇蓝色荧光H+OH-硫色素(s s)反应 Ch.P（2005）第41页/共86页第四十二页，共86页。 OHNHAgNO233AgCl白白3HNO3HNO蓝蓝淀粉试纸淀粉试纸 KI2MnOCl2 H第42页/共86页第四十三页，共86页。1、非水溶液滴定法（药典用于测定原料药） 原理：利用噻唑环上季铵和嘧啶(m dn)环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。（三）含量(hnling)测定第43页/共86页第四十四页，共86页。2、UV分光光度法（药典用于测定片剂、注射剂）（1）原理：维生素B1分子中具有共轭双键结构，具有紫外吸收(xshu)特征，可在其最大吸收(xshu)波长下测定吸收(xshu)度，根据取样量计算含量。（2）方法第44页/共86页第四十五页，共86页。Vitamin C参与机体代谢，可帮助酶将胆固醇转化为胆酸而排泄，减低(jind)毛细管的脆性，增加机体抵抗力防治坏血病，预防冠心病，大量静脉注射(jn mi zh sh)用于克山病的治疗第三节 维生素C的分析(fnx) 第45页/共86页第四十六页，共86页。二烯醇强还原性弱酸性手性CUVmax 243nm结构(jigu)与性质溶于水，不溶于氯仿(l fn)或乙醚旋光性糖类(tn li)性质水解性第46页/共86页第四十七页，共86页。 易溶于水 水溶液呈酸性一、结构(jigu)与性质1、溶解性第47页/共86页第四十八页，共86页。C3OH的pKa = 4.17C2OH的pKa = 11.572、酸性(sun xn)一元酸第48页/共86页第四十九页，共86页。二烯醇结构(jigu)二酮基结构(jigu)二烯醇结构(jigu)OOHOHCCOOCC3、强还原性第49页/共86页第五十页，共86页。L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）4、光学(gungxu)活性OOHHOO C OHHCH2OH123456*第50页/共86页第五十一页，共86页。显色显色糠醛衍生物糠醛衍生物糠醛糠醛酚类酚类脱水脱水 H糖类(tn li)的显色反应蓝色蓝色糠醛糠醛吡咯吡咯脱水脱水 HVitC50结构与糖类(tn li)相似5、具糖的性质(xngzh)第51页/共86页第五十二页，共86页。nmnmmaxOHmaxH 6、UV特征(tzhng)第52页/共86页第五十三页，共86页。去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC二、鉴别(jinbi)试验 O（一）.与氧化剂的反应(fnyng)第53页/共86页第五十四页，共86页。第54页/共86页第五十五页，共86页。第55页/共86页第五十六页，共86页。第56页/共86页第五十七页，共86页。去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸OVitC强还原性2,6-二氯靛酚褪色玫瑰红OCu2碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜红3AgNOAg黑第57页/共86页第五十八页，共86页。糖类的反应（二）蓝色蓝色糠醛糠醛戊糖戊糖脱水脱水三氯醋酸三氯醋酸 VitC或盐酸(yn sun)50吡咯(blu)USP第58页/共86页第五十九页，共86页。第59页/共86页第六十页，共86页。OCHN（蓝色）OCHO(糠醛)OCHOH3CH2OHCH（戊糖）NNH50(吡咯)第60页/共86页第六十一页，共86页。（三）杂质检查（略）1、溶液的澄清度与颜色检查2、铁、铜离子的检查：原子(yunz)吸收分光光度3、细菌内毒素第61页/共86页第六十二页，共86页。 IIVitCH去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸2指示剂 淀粉(dinfn)指示液原理（1）1、碘量法（四）含量(hnling)测定第62页/共86页第六十三页，共86页。 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解(rngji)，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6（2）方法(fngf)第63页/共86页第六十四页，共86页。 酸性(sun xn)环境 d . HCl 新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化(ynghu)速度（3）讨论(toln) 立即滴定 减免水中O2的干扰减少O2的干扰第64页/共86页第六十五页，共86页。+H2ONaHSO3Na2S2O5CHHO2O3H CHSO NaC33CHCHNaSO3OH33COCHCH、VitC注射液测定(cdng)时要加丙酮 消除(xioch)稳定剂焦亚硫酸钠的干扰第65页/共86页第六十六页，共86页。（二）2，6 - 二氯靛酚钠滴定法酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚， VitCUSPJP原理（1）第66页/共86页第六十七页，共86页。空空样样二氯靛酚液二氯靛酚液空白空白样品样品VVHAcHPO 3自身指示终点法蓝色蓝色玫瑰红玫瑰红 OHH无无色色还还原原 （2）方法(fngf)第67页/共86页第六十八页，共86页。快速(kui s)滴定 2min内 酸性(sun xn)环境 HPO3-HAc 稳定(wndng)VitC防止其他还原性物质干扰剩余比色测定 AVitC测测二氯靛酚二氯靛酚 （定量过量）（测剩余染料）（3）讨论第68页/共86页第六十九页，共86页。（4）缺点(qudin) 需经常(jngchng)标定贮存(zhcn)一周不稳定干扰多 氧化力较强（三）高效液相色谱法第69页/共86页第七十页，共86页。 维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称。目前(mqin)已知的维生素D类物质至少有十种之多，它们都是甾醇的衍生物。中国药典主要收载有维生素D2、D3原料药；维生素D2胶丸和注射剂；维生素D，注射剂。USP(24)收载有片剂、胶囊、口服液等剂型。BP(2000)收载的剂型有片剂、口服液、注射液以及钙与维生素D2、D3制成的复方片剂。 第四节 维生素D的分析(fnx)第70页/共86页第七十一页，共86页。(一)结构 维生素D2为9，10-开环麦角甾5，7，10(19)，22-四烯3-醇，又名骨化醇或麦角骨化醇。 维生素D3为9，10-开环胆甾-5，7，10(19)三烯-3-醇，又名胆骨化醇。 两者的化学(huxu)结构十分相似，其差别仅是维生素D2比维生素D3在侧链上多一个双键，C24上多一个甲基。 一、结构(jigu)与性质第71页/共86页第七十二页，共86页。HHCH2CH3CH3CH3CH3CH3HHOVD2CH3CH3HCH2CH3CH3HHOH222324VD3第72页/共86页第七十三页，共86页。(二)性质 1、性状 维生素D2、D3均为无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光或空气均易变质。 2、溶解性 维生素D2在氯仿中极易溶解，在乙醇、丙酮(bn tn)或乙醚中易溶；维生素D3在乙醇、丙酮(bn tn)、氯仿或乙醚中极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。 3、不稳定性 维生素D2、D3因含有多个烯键，所以极不稳定，遇光或空气及其他氧化剂均发生氧化而变质，使效价降低，毒性增强。本品对酸也不稳定。 4、旋光性 维生素D2具有6个手性碳原子，而维生素D3有5个手性碳原子，所以二者均具有旋光性。 第73页/共86页第七十四页，共86页。5、显色(xin s)反应 本品的氯仿溶液，加醋酐与硫酸，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后变为绿色。本反应为甾类化合物的共有反应。6紫外吸收特性 取本品，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每10ml中约含10ug的溶液。照分光光度法，在265nm的波长处测定吸收度，维生素D2的吸收系数为460-490；维生素D3的吸收系数为465-495。第74页/共86页第七十五页，共86页。(一)显色反应(fnyng) 1、与醋酐浓硫酸反应(fnyng) 取维生素D2或D3约0.5mg，加氯仿5m1溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸0.1ml，振摇，维生素D2初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。维生素D3初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。 2、与三氯化锑反应(fnyng) 取本品适量(约1000单位)，加1，2-二氯乙烷1m1溶解，加三氯化锑试液4ml，溶液即显橙红色，逐渐变为粉红色。 3、其它显色反应(fnyng) 维生素D与三氯化铁反应(fnyng)呈橙黄色，与二氯丙醇和乙酰氯试剂反应(fnyng)显绿色，均可用于鉴别，但专属性不强。 二、鉴别(jinbi)试验第75页/共86页第七十六页，共86页。(二)比旋度鉴别 取维生素D2，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1m1中含40mg的溶液，依法测定，比旋度为+102.5。至+107.5。；维生素D3加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中含5mg的溶液，依法测定，比旋度为十105。至+112。(二者均应于容器开启后30min内取样，并在溶液配制后30min内测定)。 (三)其他鉴别方法 维生素D2、D3可用薄层色谱法、HPLC法和制备(zhbi)衍生物测熔点进行鉴别。此外，亦可通过其紫外、红外吸收光谱的特征加以鉴别。第76页/共86页第七十七页，共86页。(四)维生素D2、D3的区别反应 取维生素D10mg，溶于96乙醇10ml中。取此液0.1m1，加乙醇1ml和85硫酸5ml。维生素D2显红色，在570nm波长处有最大吸收(xshu)；维生素D3显黄色，在495nm波长处有最大吸收(xshu)。 此反应也用于D2和D3的含量测定。第77页/共86页第七十八页，共86页。(一)麦角甾醇的检查(jinch)(二)前维生素D的光照产物三、杂质(zzh)检查（略）第78页/共86页第七十九页，共86页。 (一)维生素D测定法（二）讨论(toln)四、含量(hnling)测定（略） 维生素D的含量测定方法各国药典各异。USP(24)关于维生素D的测定方法有化学法、色谱法和微生物法；BP(2000)有化学法、光谱法和色谱法；而中国药典采用正相高效(o xio)液相色谱法测定。 第79页/共86页第八十页，共86页。Vitamin E 存在(cnzi)于豆类、 蔬菜、麦胚油中与生育有关，防治习惯性流产、不育症、牙周炎等；也用于心血管疾患(jhun)的辅助治疗。第五节 维生素E的分析(fnx)第80页/共86页第八十一页，共86页。苯二氢吡喃并醇第81页/共86页第八十二页，共86页。OCH3CH3R2OHR1CH3CH3CH3CH3生育酚乙酰化酚羟基维生素E强还原性第82页/共86页第八十三页，共86页。OCH3CH3R2OR1CH3CH3CH3CH3COCH3天然(tinrn)品 右旋体生物(shngw)效价右旋体:消旋体 = 1.4 : 10合成(hchng)品 消旋体手性C*第83页/共86页第八十四页，共86页。（一）结构(jigu)与性质苯环(bn hun) + 二氢吡喃环 + 饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键 易水解(shuji) OorOHHVitE醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚第84页/共86页第八十五页，共86页。1、硝酸(xio sun)反应OHNO3VitE生育红生育红生育酚生育酚7515橙红色（二）鉴别(jinbi)第85页/共86页第八十六页，共86页。