毕业生手册簿簿电子版

word本科生毕业论文(设计)手册题目：叶片外源施加SNP对干旱胁迫下花生幼苗根系抗氧化系统的影响专业班级 农学一班 姓 名 褚宏越 学 号 20112754 指导教师 万勇善 实习单位 某某农业大学 山 东 农 业 大 学2015 年 01 月 17 日一、本科生毕业论文设计守如此毕业论文设计统称毕业论文是训练学生独立进展科学研究的过程。通过撰写毕业论文，可以使学生了解科学研究的过程，掌握如何收集、整理和利用材料；如何观察、如何调查、作样本分析；如何利用图书馆，检索文献资料；如何操作仪器等方法。在这一教学过程中，学生应遵守以下规定：1、在承受毕业论文题目后，认真阅读领会毕业论文任务书中规定的任务、要求，制定工作计划进度表，做好各项准备工作。2、认真执行工作计划和进度表，保证按期完成毕业论文任务。3、要有完整的毕业论文进展情况记录，做好阶段总结，并定期向指导教师汇报工作进展情况。4、装订好的论文经指导教师审阅准许必须在辩论前三天交给指导教师。5、要遵守所在单位的规章制度和劳动纪律；如因事请假三天以内的由分管辅导员批准，四天到七天由院长批准，八天以上由学生工作处审批。6、虚心承受教师的指导，严格要求自己，发挥主观能动性，独立完成各项任务。7、杜绝抄袭、剽窃他人的学术论文成果，对自己的毕业论文质量负全面责任。二、毕业论文设计规X摘要一、毕业论文设计开题报告1、毕业论文设计开题报告是规X管理，培养学生严谨、务实的科研作风的有效途径，是学生从事毕业论文设计工作的依据。由学生在选定毕业论文设计题目后，与导师协商，讨论题意与整个毕业论文设计的工作计划，然后根据课题要求查阅、收集有关资料并编写研究提纲，于毕业生产实习前经导师所在专业或学院请有关专家参加论证后填写。专业、学院负责人审定后开始执行。二、毕业论文设计一毕业论文设计的根本要求1.学生必须查阅文献资料，数量视课题需要和学生水平而定，一般在15篇以上，其中外文资料不少于2篇。做毕业论文的学生要撰写1，5002，000字的综述做毕业设计的学生为调研报告，作为论文设计的前言局部。2.毕业论文含综述、毕业设计计算说明书含调研报告、图纸的篇幅正文字数原如此上不少于12，000字，外语专业的不少于6，000单词量。有关学院可以根据本学院的专业特点，确定本学院的字数标准，但不得低于10，000字。中外文摘要200300字；关键词35个。工程图纸数量视各专业具体情况确定。3.毕业论文思想端正、观点明确，内容精炼、层次清楚，论点明确、实事求是，论据充分、可信；毕业设计的技术措施、计算参数、技术经济指标的选择合理，设计方案可行，主题明确、重点突出，内容精炼、层次清楚，公式应用、计算准确。4.图样整洁、清楚，布局合理。线条粗细符合要求，圆弧连接光滑，尺寸标注规X，文字注释必须使用工程字书写，必须采用最新的国家标准。从事毕业设计的学生必须有手工绘制的图纸和一定数量的CAD图纸。所有图线、图表、线路图、流程图、程序框图、示意图等不准徒手画，必须按国家规定标准或工程要求绘制。5.除外语等特殊专业需用该专业语言写作外，其他专业均用汉语写作。用字要规X，文字通顺，语言流畅，书写工整，无错别字，不准请人代写。6.文中的专业术语、计量单位、图表格式、文字书写以与引用文献，均应按正式出版物要求来表述。7.毕业论文设计一式两份，由辩论小组交学院存档。二字型、字号与格式要求1.格式要求：毕业论文设计应按照科技论文格式由学生本人用计算机排版、打印，一律使用统一封面A4页面。打印规格：页面纵向使用，左边距2.5cm，右边距2cm，上边距2.5cm，下边距2cm。2.字型、字号要求：1题目：3号黑体字。下方空一行，用4号楷体字注明作者与指导教师。2摘要、关键词：5号黑体字，内容用5号宋体字。3中外文目录：小4号楷体字。统一按1，1.1，1.1.1等层次编写，并注明页码。4正文层次标题：二级标题，4号黑体字。三级标题，小4号楷体字加深。统一按1，1.1，1.1.1等层次编写，一律顶格，后空一格写标题。如正文中引用的符号较多，可在正文前列出符号表。正文内容含参考文献、附录等：小4号宋体字。5图、表：标题小4号宋体字加深，内容5号宋体字。并按文中次序编排。6参考文献应是公开出版的书刊；文献必须按引用顺序排列；文献中的作者均按先姓后名排列，多位作者只列前两位两位作者之间用逗号隔开，后面作者用等“等字之前用逗号隔开表示。书写格式：【编号】作者.论文题目.期刊名称，出版年，卷号期号：起止页码【编号】作者.书名.出版者，出版年：起止页码三毕业论文设计与管理档案装订要求为便于操作和管理，每位学生的毕业论文设计与毕业论文设计管理档案分别单独装订成册。1.毕业论文设计装订要求每生一册1封面；2中外文目录；3正文：毕业论文题目、作者年级、专业与指导教师注明职称、中外文内容摘要、中外文关键词、前言综述或调研报告、正文；4参考文献或资料按正文中引用的先后顺序列出，包括文献编号、作者某某、书名、或文集名、期刊名、出版单位、出版年月、页码等；5致谢词；6附录包括计算程序与说明、过长的公式推导等；7附件包括外文文献译文、图纸等。三、毕业论文设计指导教师评语论文设计辩论前，指导教师应对所指导学生的论文设计进展认真、全面审查，对学生的外语水平、毕业论文的完成情况与质量、工作能力与态度等写出评语，明确明确是否同意其参加辩论。四、毕业论文设计辩论委员会辩论资格审查与评语论文设计辩论前，学院辩论委员会小组对申请参加辩论的学生进展辩论资格审查，确定辩论资格。凡审查不合格者，应令其返工，直到达到要求为止。审查的主要内容包括：论文设计工作量是否达到大纲要求，形式是否符合规定；资料和论据是否可靠、充分，设计的技术措施、计算参数、技术经济指标的选择是否合理；图纸的数量与质量，说明书的文句与书写质量等。由辩论委员会小组根据学生辩论情况、辩论记录、指导教师评语等写出辩论评语，其主要内容包括：论文设计宣读情况，论文设计方案的合理程度，回答如下问题的准确程度，表达能力的强弱等，确定辩论成绩。最后核定总评成绩，并由辩论委员会主任组长签字。对于向学校推荐的优秀学士学位论文和不与格毕业论文应由学院毕业论文领导小组集体讨论确定。本科生毕业论文设计开题报告说明、开题报告前的准备毕业论文(设计)题目确定后，学生应尽快征求导师意见，讨论题意与整个毕业论文(或设计)的工作计划，然后根据课题要求查阅、收集有关资料并编写研究提纲，主要由以下个几局部构成：1、研究(或设计)的目的与意义。应说明此项研究(或设计)在生产实践上或对某些技术进展改革带来的经济、生态与社会效益。有的课题过去曾进展过，但缺乏研究，现在可以在理论上做些探讨，说明其对科学开展的意义。2、国内外同类研究(或同类设计)的概况综述。在广泛查阅有关文献后，对该类课题研究(或设计)已取得的成就与尚存在的问题进展简要综述，只对本人所承当的课题或设计局部的已有成果与存在问题有条理地进展阐述，并提出自己对一些问题的看法。3、课题研究(或设计)的内容。要具体写出将在哪些方面开展研究，要重点突出。研究的主要内容应是物所能与、力所能与、能按时完成的，并要考虑与其它同学的互助、合作。4、研究(或设计)方法。科学的研究方法或切合实际的具有新意的设计方法，是获得高质量研究成果或高水平设计成就的关键。因此，在开始实践前，学生必须熟悉研究(或设计)方法，以防止蛮干造成返工，或得不到成果，甚至于写不出毕业论文或完不成设计任务。5、实施计划。要在研究提纲中按研究(或设计)内容落实具体时间与地点，有计划地进展工作。二、开题报告开题报告可在导师所在系(教研室)、专业或院X围内举行，须适当请有关专家参加，导师必须参加。报告最迟在毕业(生产)实习前完成。三、须知事项1、开题报告的撰写完成，意味着毕业论文(设计)工作已经开始，学生已对整个毕业论文(设计)工作有了周密的思考，是完成毕业论文(设计)关键的环节。在开题报告的编写中指导教师只可提示，不可包办代替。2、无开题报告者不准申请辩论。3、本表原件用钢笔填写，字迹务必清楚。五、毕业论文设计开题报告一、选题依据拟开展研究项目的研究目的、意义花生在生长过程中经常会遇到干旱、盐碱、高温、低温等不良环境条件的影响，导致植物水分亏缺，从而产生渗透胁迫，影响花生的生长发育。我国70%以上的花生种植在干旱半干旱地区缺，加上夏季高温引起的剧烈蒸发，使干旱危害非常普遍，全国常年因干旱引起的花生减产率平均在20%以上。因此，干旱是我国花生生产上分布最广、危害程度最大的限制因素，是花生生产必须解决的关键问题。另一方面，植物经过长期的逆境锻炼也进化产生了一系列抵制不良环境的机制，植物对干旱产生了许多抵抗机制。前人对生长发育调节、生长发育调节、渗透调节物质介导的渗透调节、气孔的主动关闭等已做出许多研究，并且相关研究越来越多证据明确抗氧化对花生抗旱起到重要作用。一氧化氮(nitric oxide,NO)被认为是一种新的植物信号分子，参与植物生长发育调控和对生物与非生物环境胁迫的应答反响。前人通过SNP的添加处理证实了NO能够促进盐胁迫下植物的根系生长陈明,沈文飚,阮海华,等.一氧化氮对盐胁迫下小麦幼苗根生长和氧化损伤的影响J.植物生理与分子生物学报,2004, 30(5): 569-576.；吴雪霞,朱月林,朱为民,等.外源一氧化氮对NaCl胁迫下番茄幼苗生长的影响J,西北植物学报,2006,26(6): 1206-1211.增强根系活力提高可溶性糖含量以与脯氨酸含量,降低硫代巴比妥酸反响物含量胡凡波.外源NO对盐胁迫下某某花幼苗生理与生物碱代谢的影响D.某某农业大学，2011.然而，目前关于干旱胁迫下施加NO对植物根系的影响的研究还较少，且大局部关于NO对逆境下植物根系的影响多是采用根部施加的方法。叶片施加SNP对植物根系的间接作用这方面的研究内容还未见报道。因此本研究从外源施加NO后对根系内源NO含量，抗氧化指标与根系生物量等方面分析外源NO对不同抗旱性花生根系生长与活性氧代谢的调控机制，以期为探明为SNP在生产上的应用提供理论依据。二、 文献综述内容在充分收集研究主题相关资料的根底上，分析国内外研究现状，提出问题，找到研究主题的切入点，附主要参考文献1. 植物中NO的来源 一氧化氮是一种易扩散的具有生物活性的气体小分子信号物质，在植物生长发育和胁迫响应中起重要作用。NO在植物体内的主要来源，包括一氧化氮合酶途径、硝酸复原酶途径、非酶促途径3种途径1.1硝酸复原酶NR途径NR是位于胞浆的以NAD(P)H为电子供体催化硝酸盐复原生成亚硝酸盐，具有内部电子传递链，是高等植物体内控制碳代谢和氮代谢的关键酶和限速酶1,2。Yamasaki等3、Yamasaki和Sakihama4报道在生理pH7.0和NADH存在条件下,玉米幼苗中纯化的硝酸复原酶可催化NO2-和NO3-复原产生NO,且以NO2-为底物的NO产率高于底物NO2-,此过程可被叠氮化钠、谷胱甘肽或无氧条件所抑制。如今关于植株中硝酸复原酶催化产生NO的研究已经有许多，如大豆叶片5,6、菠菜叶片7、烟草根系8等。植物根系细胞质中的NR活性受硝酸盐和氧气含量等外界环境因子的影响和调节9-12。除了这些定位在根系细胞质中的硝酸复原酶外，植物根系细胞质膜上还结合着一类特异性的硝酸复原酶(plasma membrane-bound nitrate reductase,PM-NR)，与细胞质中存在的硝酸复原酶不同，这些与质膜相结合的硝酸复原酶能够利用琥珀酸盐作为电子供体在细胞外质体中将硝酸盐复原成亚硝酸盐17。1.2 一氧化氮合酶NOS途径在哺乳动物体内,主要通过NOS形成NO，NOS以L-精氨酸、O2与NADPH为底物催化而成，FAD、FMN、血红素、四氢叶酸、Ca2+/CaM和Zn2+为NOS的辅基19，其反响过程为：L-精氨酸+NADPH+O2NO+L-胍氨酸+NADP。植物体中也已证实有NOS存在，大豆细胞提取物中的NOS活性对Ca2+有依赖性，且主要位于细胞质中。利用NOS抗体检测或者活性测定18,20发现,植物体内NOS蛋白与细胞色素P-450复原酶具有很高的同源性，而动物NOS抑制剂也同样抑制植物NO的产生。但是在植物体内一直未寻找到与动物NOS同源性相近的基因。2003年10月,在拟南芥中也克隆到了与植物生长和激素信号转导有关的NOS基因和相应的cDNA(命名为AtNOS1)21,通过研究AtNOS1在第一个外元处产生变异的突变体,发现受ABA调控的NO产生和气孔关闭被明显阻断,具体表现为失绿,苗、根和花序的生长缓慢,而导入外源AtNOS1或用NO供体处理后上述性状均得以恢复。至此植物NOS与其编码基因终于在植物中发现。2003年克隆到的NOS不是真正的NOS基因。多看看文献，拟南芥 AtNOS1 在水稻和玉米上的同源基因 Q66GP9、AY110367 的重组蛋白并不表现出一氧化氮合酶活性。进一步的研究明确，它在拟南芥线粒体中主要作为GTP酶发挥作用，因此其作为一氧化氮合酶的功能受到质疑，于是，AtNOS1被更名为AtNOA1。AtNOA1在本质上并不是一个NOS蛋白,而可能作为调控蛋白影响NO的合成和积累.最近,Foresi等23在Ostreococcus属的2个绿藻品种中分别克隆到依赖于Arg的NOS基因,这是首次有关植物NOS基因克隆的报道,该研究结果为证实植物中存在NOS提供了有力的直接证据。但高等植物中目前尚未发现类似哺乳动物的NOSFrhlich A, Durner J. The hunt for plant nitric oxide synthase (NOS): Is one really needed? J. Plant Sci., 2011,181:401-404.1.3 非酶促反响途径植物通过多种非酶途径形成 NO。植物叶片吸收NO2-后，可在光和类胡萝卜素的介导下反响生成NO24。亚硝酸盐与复原剂在pH值小于4.0时可自动释放NO，如亚硝酸能够与抗坏血酸AsA反响形成脱氢抗坏血酸和NO；赤霉素和脱落酸能迅速地酸化质外体介质，促使质外体的非酶促NO合成25。NO还可能通过植物去硝化、氮固定或呼吸而获得26。另外，X斌等用电子自旋共振ESR方法验证了高等植物叶绿体内光诱导电子传递也可产生NO27。2. NO对植物根系生长发育的作用和影响NO不仅是植物生长和发育的调节分子，在植物生长、发育、衰老、细胞程序性死亡PCD等生理过程中起重要作用，还参与响应植物抗病和抗生物胁迫等多种不同形式的逆境，并与植物激素相互作用调节植物生理和病理过程28-31。NO可能是一种可延缓植物衰老的天然植物生长调节物质，其作用机制与抑制乙烯产生相关。NO对生物体的作用具有双重性：在低浓度下,它有保护作用，而高浓度NO如此对细胞带来严重伤害。2.1 NO对植物根系伸长和重力感应的影响NO在植物根系伸长和重力感应过程中发挥着重要的作用。NO缓释剂处理能够诱导玉米根尖的伸长，NO去除剂甲基蓝能够抑制NO缓释剂诱导的玉米根尖伸长，NO诱导的根尖伸长还与NO浓度密切相关。32因此,有人推测NO和IAA在诱导玉米根尖伸长的过程中共享了某些信号转导途径33。除了维持根系伸长外,NO还能够抑制植物根系的伸长。研究发现,高浓度的外源NO能够有效抑制白羽扇豆根系的发生和伸长，高浓度的外源NO同样能够显著抑制番茄根系的伸长34。研究还明确，根内积累的高浓度NO同样能够有效抑制水稻和小麦根系的伸长和生长35-36。这些结果明确，NO对植物根系伸长和生长的影响与其浓度密切相关。一般而言，低浓度的NO能够维持甚至促进根系的生长和伸长,而高浓度的NO对根系的伸长和生长具有抑制作用。熊杰37-38还发现施用NO特异性去除剂cPTIO能够有效阻碍根重力感应现象，这明确内源NO在调节根系重力感应过程中同样发挥着重要的作用。2.2 NO对不定根、侧根和根毛发生的影响前人对NO促进不定根的机制进展了深入研究，其结果明确,自上而下转运的IAA能够诱导NO在黄瓜下胚轴基部的积累，随着NO含量的增加，通过激活cADPR或IP3信号通路调节释放出细胞内储存的Ca2+,或者通过激活细胞质膜上的Ca2+通道，将细胞外的Ca2+泵进细胞质中,提高细胞质中的Ca2+浓度,激活依赖Ca2+的蛋白激酶calcium-dependent protein kinases, CDPKs，最终促进不定根的发生39-42。因此，NO缓释剂硝普钠(sodium nitroprusside, SNP)能够局部恢复cPTIO造成的侧根形成抑制。2.3 NO对根系结构和成分的影响谷胱甘肽(glutathione,GSH)作为抗氧化剂以与金属硫蛋白metallothioneins, MTs和植物螯合肽phytochelatins, PCs的前体，在植物中具有重要的功能。研究明确,NO能够调控苜蓿根部GSH的合成,而且对2种GSH合成酶基因gshs和hgshs的表达调控作用有所不同43。低浓度的NO处理能够增加根系中的纤维素含量，高浓度的NO处理降低了根系中的纤维素含量44。NO作为易扩散的气体小分子，似乎不存在特异性的受体。然而，细胞能够感受到NO信号分子。植物中的NO信号转导过程同动物中的信号转导过程相类似，包括依赖环鸟苷单磷酸cyclic guanosinemonophosphate, cGMP的信号转导和不依赖cGMP的信号转导2条途径45，其中不依赖cGMP的信号转导途径还包括NO通过直接调节转录因子构象来调节植物基因表达46。目前有关NO在植物根系生长发育过程某某号转导途径的研究结果均明确，NO既可通过依赖cGMP的信号转导途径又可通过不依赖cGMP的信号转导途径来参与调控植物根系生长发育的。3.1 直接与 O2-作用NO能与O2-反响生成ONOO-。在水分胁迫下，用50mol/L SNP处理小麦2h，小麦叶片SOD活性低于对照组，但O2-浓度却呈下降趋势，分析这可能是NO与O2-结合形成ONOO-，从而减少了O2-量有关。Mata等也报道，NO对干旱和盐胁迫引起小麦幼苗氧化胁迫的缓解效应可能与NO同ROS的相互作用有关47。 3.2 直接与酶作用NO可通过直接与CAT、APX、POD等抗氧化酶类中血红素铁结合来调节它们的活性，以此来调节H2O2的含量。另外，细胞色素C氧化酶COX也是一种含血红素铁的酶类，NO可通过调节它的酶活性来影响ROS的积累。48研究发现NO抑制植物线粒体COX活性的同时也可增强抗氰呼吸，防止因线粒体电子传递链受阻而导致的ROS积累。NO可破坏顺乌头酸酶ACO的4Fe-4S中心不排除NO可改变铁离子的氧化复原形式、巯基亚硝酰化以与酶催化位点构型重排的可能性,从而导酶活性改变，NO的衍生物ONOO-也能抑制ACO活性。当ACO活性被抑制后，线粒体三羧酸循环TCA中断，导致流经ETC的电子流逐渐降低，从而减少体内ROS的产生，缓解氧化胁迫；另一方面，当线粒体ACO活性被抑制后，柠檬酸浓度上升，从而诱导交替氧化酶AOX的活性升高。AOX在ETC中起减少ROS产生的作用，能吸收细胞色素链饱和后剩下的电子。ACO与NO反响后，酶活性受抑制，变为调节细胞铁状态的mRNA结合蛋白IRP，以维持体内铁状态的稳定。植物细胞铁离子水平会影响Fenton反响,从而影响O2-通过 Haber-Weiss和Fenton反响产生OH。当然,OH的产生同样也受到O2-的积累量的影响。493.3 通过cGMP调节通过与其可溶性受体鸟苷酸环化酶GC的铁离子结合，改变GC的立体结构从而提高其活性，并进一步导致细胞内第二信使 cGMP 生成的增加，激活依赖于 cGMP的蛋白激酶。环ADP核糖cADPR作为下游信号分子参与信号传递，激活对钌红敏感的Ca2+通道,从而使胞内Ca2+浓度增加。Ca2+刺激水杨酸SA，以调节CAT、APX和POD活性，同时，SA还可诱导PAL水杨酸诱导激酶SIPK1、PR-1等基因的表达。以动物为研究材料的结果已经证明，低浓度的NO可以调节Cu、Zn-SOD等抗氧化酶编码基因的表达，也可以影响与其表达有关的转录因子的转录水平，但在植物中还未见有SA对SOD编码基因表达调节的报道。503.4 通过H2O2、SA间接调节NO、H2O2和SA都可作为植物体中的信号分子，3者之间在一定条件下可以协同作用。NO可以使植物中H2O2、SA的含量上升，H2O2也能提高内源性NO、SA含量，同样SA也能引起H2O2含量的增加。NO可以通过H2O2介导间接ROS代谢进展调节。一方面，H2O2也可氧化ACO的4Fe-4S中心，从导致酶活性改变；另一方面，H2O2可诱导谷胱甘肽-S-转移酶GST基因和谷胱甘肽过氧化物酶GPX基因的表达，诱导萌发的水稻胚和拟南芥叶片中APX基因的表达。同样，NO也可以通过SA介导间接地对ROS代谢进展调节，SA可与含铁离子为活性中心的ACO、LOX和POD等相结合来调节ROS代谢。虽然，NO可通过多种途径调节ROS代谢水平，但就具体物种在一定条件下的调节途径而言，如此是非常复杂的，而且可能因物种、胁迫剂量、NO剂量等因素的差异而有所不同。514. NO对逆境下植物根系的影响NO不仅能够刺激需光种子萌发和根系生长，还能有效缓解重金属Pb和Cd对根系生长的抑制作用。一些试验结果明确，NO是通过激活SOD酶活性间接或直接去除重金属诱导产生的ROS来缓解毒害作用的。研究明确,NO对维持木槿和玉米根系的伸长同样是不可缺少的，NO特异性去除剂处理能够显著抑制根系的伸长。除了直接参与维持植物根系伸长外，外源NO处理还能够显著缓解重金属Cd、Pb、Cu、Al以与盐胁迫对植物根系伸长造成的抑制。现在一般认为外源NO缓解逆境对植物根系伤害的机理包括以下三点:第一,作为抗氧化直接去除逆境胁迫诱导产生的ROS;第二,调节根系抗氧化酶系统去除逆境胁迫诱导产生的ROS;第三,激活一系列逆境抗性基因的表达和调控。52对于干旱胁迫下NO对植物根系的影响研究，赵立群等研究干旱胁迫下一氧化氮对小麦离体根尖离子吸收的影响的试验结果证明, NO 能够通过调节质膜 H+-ATPase 活力影响植物对离子的选择吸收, 从而提高耐旱性。利用干旱敏感性不同的 3 个小麦(Triticum aestivum L.)品种的离体根尖, 比拟NO 对干旱胁迫的响应与其对离子吸收的影响。干旱胁迫下, 耐旱品种陇春8139 根尖中大量产生 NO, K+和 Ca2+被大量吸收, 而 Cl被排出体外, 质膜 H+-ATPase 活性升高; 而干旱敏感品种甘麦 8 号和某某24 的根尖中 NO、离子含量和质膜 H+-ATPase 活性的变化呈相反趋势。NO 供体硝普纳(SNP)处理使 3 个品种根尖中的 K+和 Ca2+含量增加, Cl含量下降, 并能提高质膜 H+-ATPase 活力; NOS 抑制剂N-nitro-L-arginine(LNNA)和 NO 去除剂2-phenyl-4,4,5,5-tetramethyl-imidazoline-1-oxyl- 3- oxide(PTIO)能够逆转这一效果。Na+含量在所有处理下都没有明显变化。4.1干旱胁迫下 NOS 活力与 NO含量干旱胁迫下抗旱品种NOS活力和NO含量增加，参加NO供体SNP和NO抑制剂的根系NO含量如此明显下降。PEG干旱处理不同抗旱品种小麦其根系的含水量都显著下降，NO的供体SNP能抑制干旱处理剂PEG作用恢复植物的含水量，并且能恢复被提高的膜透性。4.2干旱胁迫下 NO 对离子吸收的影响抗旱品种干旱条件下K+和 Ca2+含量比处理前增加 2而 Cl含量下降，SNP的处理效果使抗旱与不抗旱品种都有这种趋势，但未经SNP处理的不抗混品种离子含量变化与抗旱品种相反。干旱胁迫下 NO 对质膜 H+-ATPase 活力的影响 质膜 H+-ATPase 活力受 PEG 刺激, 在抗旱小麦品种的根尖中增加，而在不抗旱小麦的根尖中下降。SNP 可以增加不同小麦品种质膜 H+-ATPase 活力。53参考文献1 Huber S C,Bachmann M,Huber J L.Post-translation regulation of nitrate reductase activity: a role for Ca2+and 14-3-3 proteinsJ.Trends Plant Sci,1996,1:432-438.2 KaiserWM,WeinerH,HuberS C.Nitrate reductase in higher plants: a casestudy for transduction of environmental stimuli into control of catalytic activityJ.Physiol Plant,1999,105:385-390.3 Yamasaki H,Sakihama Y,Takahashi S.An alternative pathway for nitric oxide production in plant:new feather of an old enzymeJ.Trends Plant Sci,1999,4:128-129.4 Yamasaki H,Sakihama Y.Simultaneous production of nitric oxide and peroxynitrite by plant nitrate reductase: in vitro evidence for the NR-dependent formation of active nitrogen speciesJ.FEBS Lett,2000,468 (1):89-92.5 Dean J,Harper J.Nitric oxide and nitrous oxide production by soybean and winged bean during the in vivo nitrate reductase assayJ.Plant Physiol,1986,82:718 -723.6 Klepper L.Nitric oxide emissionsfromSoybean leaves during in vivo nitrate reductase assaysJ.Plant Physiol,1987,85:96-99.7 Rockel P,Strube F,Rockel A,et al.Regulation of nitric oxide (NO) production by plant nitrate reductasein vivoand in vitroJ.J Exp Bot,2002,53:103-110.8 Stohr C,Strube F.MarxG,et al.A plasma membrane-bound enzyme of tobacco roots catalyses the formation of nitric oxide from nitriteJ.Planta,2001,212:835-8419 HARPER J E.Evolution of nitrogen oxides during in vivo nitrate reductase assay of soybean leaves J .Plant Physiol,1981,68:1488-1493.10 KLEPPER L A.Nitric oxide emissions from soybean leaves duringin vivonitrate reductase assays J .Plant Physiol,1987,85:96-99.11 KLEPPER L A.parison between NO evolution mechanisms of wild-type and nr1 mutant soybean leaves J.Plant Physiol,1990,93:26-32.12 YAMASAKI H,SAKIHAMA Y,TAKAHASHI S.An alter-native pathway for nitric oxide production in plants:new features of an old enzyme J.Trends Plant Sci,1999(4):128-129.13 YAMASAKI H.Nitrite-dependent nitric oxide production path-way: implications for involvement of active nitrogen species in pho-nitrate reductase activityJ.Plant Soil,2003,253:155-167.14 BOTREL A,MAGN*C,KAISER W M.Nitrate reduction, nitrite reduction and ammol/lenium assimilation in barley roots in response to anoxiaJ.Plant Physiol Bioch,1996,34:645-652.15 ST;HR C,STREMLAU S.Formation and possible roles of nitric oxide in plant rootsJ.J Exp Bot,2006,57:463-470.16 KAISER W M,WEINER H,HUBER S C.Nitrate reductase in higher plants:a case study for transduction of environmental stimuli into control of catalytic activity J .Physiol Plant,1999,105:384-389.17 FOREY C H,GRAHAM N.Photosynthetic nitrogen assimilation and associated carbon metabolismM.London:Kluwer Academic Publishers, 2002:49-62.18 Durner J,Wendehenne D,Klessig D F.Defense gene induction in tobacco by nitric oxide,cyclic GMP,and cyclic ADP2 riboseJ.Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(17):10328-10333.19 Marietta M A.Nitric oxide synthase structure and mechanismJ.J Bio Chem,1993,268:12231-12234.20 Chandok M R,Ytterberg A J,VanWijk K J,et al.The pathogen-inducible nitric oxide synthase (iNOS) in plantis a variant of the P protein of the glycine decarboxylase plexJ.Cell,2003,113:469-482.21 Guo F Q,Okamoto M,Crawford NM.Identification of a plant nitric oxide synthase gene involved in hormonal signalingJ.Science,2003,302:100-103.22X维仲,X润杰,裴真明,等.NO在植物中的信号分子功能研究:进展和展望J.自然科学进展,2008,18(1):10-24.23 FORESI N,CORREA-ARAGUNDE N, PARISI G,et al.Characterization of a nitric oxide synthase from the plant kingdom: NO generation from the green algaOstreococcus tauriis light irradiance and growth phase dependentJ. Plant Cell,2010,22:3816-3830.24 COONEY R V,HARWOOD P J,CUSTER L J,et al.Light mediated conversion of nitrogen dioxide to nitric oxide by carotenoidsJ.Environmental Health Perspectives,1994,102:460-462.25 WENDEHENNEW D,DUMER J,KLESSIG D F.Nitric oxide: a new player in plant signaling and defence responseJ.Current Opinion in Plant Biology,2004, 7:449-455.26 WOJTASZEK P.Oxidative burst: an early plant response to pathogen infectionJ.Biochem,2000,322:681-692.27 X斌,X淑晓,宋玉光,等.高等植物叶绿体中光诱导生成NO的ESR证据J.高等学校化学学报,2004,25(6):1139-1141.28 Guo F Q,Crawford N M.Arabidopsis nitric oxide synthase1 is targeted to mitochondria and protects against oxidative damage and dark-induced J.Plant Cell,2005,17(12):3436-3450.29 Durner J,Wendehenne D,Klessig D F.Defense gene induction in tobacco by nitric oxide,cyclic GMP,and cyclic 165 ADP-riboseJ.Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(17):10328-10333.30 Delledonne M,Xia Y,Dixon R A,et al.Nitric oxide functions as a signal in plant disease resistanceJ.Nature.1998,394(6693):585-588.31 Bethke P C,Libourel I G,Jones R L.Nitric oxide reduces seed dormancy in ArabidopsisJ.J Exp Bot.2006,57(3):517-526.32 GOUVER C M C P,SOUZA J F,MAGALHAES C A N,et al.NO-releasing substances that induce growth elongation in maize root segmentsJ.Plant Growth Regul,1997,21:183-187.33 GOUVER C M C P,SOUZA J F,MAGALHAES C A N,et al.NO-releasing substances that induce growth elongation in maize root segmentsJ.Plant Growth Regul,1997,21:183-187.34 CORREA-ARAGUNDE N,GRAZIANO M,LAMATTINA L.Nitric oxide plays a central role in determining lateral root development in tomato J.Planta,2004,218:900-905.35 PERRINE-WALKER F M,GARTNER E,HOCART C H,et al. Rhizobium -initiated rice growth inhibition caused by nitric oxide accumulation J.Mol Microbe-Plant Interact,2007,20:283-292.3636 GROPPA M D,ROSALES E P,IANNONE M F,et al.Nitric oxide,polyamines and Cd-induced phytotoxicity in wheat rootsJ.Phytochemistry,2008,69:2609-2615. 37XIONG J,LU H,LU K,et al.Cadmium decreases crown root number by decreasing endogenous nitric oxide,which is indis-pensable for crown root primordia initiation in rice seedlings J.Planta,2009,230:599-610.38熊杰.NO缓解水稻镉毒害的作用与其生理机制D.某某:某某大学39 PAGNUSSAT G C,SIMONTACCHI M,PUNTARULO S,etal.Nitric oxide is required for root organogenesis J. Plant Physiol,2002, 129:954-956. 40TIAN Q Y,SUN D H,ZHAO M G,et al.Inhibition of nitric oxide synthase (NOS) underlies aluminum-induced inhibition of root elongation inHibiscus moscheutosJ . New Phytol,2007,174:322-331.41 COONEY R V,HARWOOD P J,CUSTER L J,et al.Light-mediated conversion of nitrogen dioxide to nitric oxide by ca-rotenoidsJ.Environ Health Perspect,1994,102:460-462.42 WENDEHENNE D,PUGIN A,KLESSIG D F,et al.Nitric oxide: parative synthesis and signaling in animal and plant cellsJ.Trends Plant Sci,2001(6):177-183.43 INNOCENTI G,PUCCIARIELLO C, LE GLEUHER M,etal.Glutathione synthesis is regulated by nitric oxide inMedicago truncatul aroots J. Planta,2007,225:1597-1602. 44CORREA-ARAGUNDE N, LOMBARDO C, LAMATTINAL.Nitric oxide:an active nitrogen molecule that modulates cellulose synthesis in tomato rootsJ.New Phytol,2008,179:386-396.45ARASIMOWICZ M,FLORYSZAK-WIECZOREK J.Nitric oxide as a bioactive signaling molecule in plant stress responsesJ.Plant Sci,2007,172:876 -887.46 NEILL S J,DESIKAN R,HANCOCK J T.Nitric oxide signaling in plants J.New Phytol,2003,159:11-35.47CLARKE A, DESIKAN R, HURST R D, et al. NO way back:nitric oxide and programmed cel1 death in Arabidopsis thaliana suspension culturesJ.The Plant Journa1, 2002, 24: 667- 677.48 KLESSIG D F, DUMER J, NOAD R, et al.Nitric oxide and salicylic acid signaling in plant defense J.Proc Natl Acad Sci USA, 2000, 97: 8849- 8855.49 吴雪霞, 朱月林, 朱为民, 等.外源一氧化氮对 NaCl 胁迫下番茄苗生理影响J.中国农业科学, 2006, 39( 3) : 575- 581.50 BOGDAN C.Nitric oxide and the regulation of gene expressionJ. Trends Cell Biol, 2001, 11: 66- 7551 X招龙, X绍铃, 孙益林.外源一氧化氮对梨叶片感染轮纹病菌后膜脂过氧化的影响J.应用生态学报, 2007, 18( 7) : 1568- 157252熊杰.NO缓解水稻镉毒害的作用与其生理机制D.某某:某某大学图书馆,2009.53赵立群 X玉良 孙宝腾 王彩琴 干旱胁迫下一氧化氮对小麦离体根尖离子吸收的影响J.作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2009, 35(3): 530534.三、研究方案1、研究内容1. 研究不同类型花生品种叶片外源施加SNP对干旱胁迫下花生根系内源NO含量产生差异，明确外源NO是通过影响内源NO产生而达到调控作用的。2. 研究不同类3. 型花生品种叶片外源施加SNP对干旱胁迫下花生根系生长与活性氧代谢的调控，为氮氧类抗旱剂的应用研究提供理论依据。2、 实验材料山花9号，花育22，ICG6848，沂南四粒糙3、 试验设计以山花9号，花育22，ICG6848，沂南四粒糙为试验材料，按照沙床培养方法见下文备注培养花生幼苗。正常培养第8d，标记倒二叶。以0.2mM SNP涂抹标记叶右侧小叶，反复涂抹三次加强处理，对照如此涂抹去离子水。培养第9d以15%PEG用Hoaglangd营养液配置模拟干旱处理。每个处理6次重复，每天浇灌100ml溶液/盒。每品种4个处理，分别是对照+不涂，对照+涂，干旱+不涂，干旱+涂，共16个处理。PEG处理第5 d每个重复取健壮，整齐一致幼苗冲洗干净病用滤纸吸干外表水分，测定株高后，分地上部和根，105杀青30min，80烘干至恒重后称重记录。同时取根系，用蒸馏水迅速冲洗干净并用滤纸吸干外表水分液氮速冻，置入-80低温保存测定NO含量与抗氧化指标SOD，POD，CAT，O2-,可溶性蛋白，MDA。计算干物质胁迫指数，株高胁迫指数，并分别进展差异性与相关性分析。沙床培养方法：取饱满，大小均匀的花生种子进展外表清洁与消毒后，用去离子水冲洗干净，播种在装有洗净过筛的河沙的塑料盒中，在PGX智能光照培养箱中，25/15昼/夜避光发芽。幼苗出土后5d左右，使用Hoaglangd溶液培养，每天16h光/8h暗，25/15昼/夜培养。每个重复30粒种子，每天浇灌100ml溶液/盒。4、 实验方法根据研究内容或测定指标选择适宜的实验方法内源NO含量的测定方法参照Schmidt和Kelm114的Griess反响进展，略做改动115。各取1g选择长势根本一致的叶片，分别放入3ml 40mM HEPES缓冲液中(pH 7.2),其中一份含有2.5%(w/v)血红蛋白,另一份无血红蛋白，37暗孵育1h,分别作为对照和处理样品。用不含血红蛋白的HEPES缓冲液5ml冲洗两遍，以去掉血红蛋白的颜色。然后，将对照和处理叶片参加1ml 40 mM HEPES在液氮内研磨，4ml 40 mM HEPES润洗。40 mM HEPES-KOH (pH 7.2)缓冲液中包含1 mM DTT，15mM MgCl2和10M FAD。双层纱布过滤匀浆，然后离心(27,000g，20min)。取上清液参考试剂盒(Beyotime Biotech Inc., Jiangsu, China)进展测定。计算公式为:ODNO= ODT-ODC,然后根据标准曲线算出NO含量(ngg-1FW)。植物材料按1:5的比例用提取液50mmol/L PBS，pH7.8和5%w/wPVPP冰浴研磨，12,000g 4离心15min，上清液用于CAT、SOD、POD测定。SOD和CAT的反响测定按照赵世杰等120的方法，POD的反响测定参照Hammerschmidt